Ensayos de hibridación in situ con fluorescencia (FISH) para diagnosticar la malaria

• Cada frotis fino se preparó a partir de 4 μl de la mezcla, se secó al aire y se fijó con metanol. Cada muestra se analizó mediante ensayos P-Genus, PF y PV FISH.
• Después de agregar 12 μl de tampón de hibridación apropiado con mezcla de sonda a cada frotis fijado con metanol, el frotis se cubrió con un cubreobjetos de plástico y se colocó en una cámara húmeda a 37 °C durante 30 minutos para la hibridación.
• Después de 30 minutos, cada frotis se lavó dos veces durante 2 minutos cada uno con 1x Wash Buffer a temperatura ambiente, seguido de un enjuague con 1x Rinse Buffer.
• Después de secar los frotis en completa oscuridad, se añadió una gota de contratinción a cada frotis. Luego, cada frotis se cubrió con un cubreobjetos de vidrio y se observó en un microscopio de fluorescencia con un aumento de 1000X.
• En el ensayo P-Genus FISH, la sonda específica de Plasmodium está marcada con un tinte fluorescente verde Alexa 488. Por lo tanto, todos los parásitos Plasmodium aparecerían verdes bajo el filtro azul (Excitación 492 nm; emisión 530 nm) cuando se observan en un microscopio de fluorescencia. Los controles normales y los parásitos que no son de malaria no serán visibles debajo del filtro azul.

Interpretación cualitativa de los resultados

El ensayo FISH detectó todas las especies de Plasmodium analizadas, especifican muestras positivas. Los ensayos FISH detectaron todas las etapas de los parásitos de la malaria presentes en la sangre, incluidos los gametocitos.

 

A continuación te dejo un pequeño video que explica que es la técnica FISH y sus aplicaciones para que lo tengas más claro. :)

 

 Referencia bibliográfica

1.	Shah J, Mark O, Weltman H, Barcelo N, Lo W, Wronska D, et al. Fluorescence in situ hybridization (FISH) assays for diagnosing malaria in endemic areas. PLoS One [Internet]. 2015 [citado el 09 de enero de 2022];10(9):e0136726. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/labs/pmc/articles/PMC4558036/