Diagnóstico de malaria humana mediante PCR
Recolección de muestras de sangre humana obtenidas por punción en el dedo. La sangre se vertió sobre papel de filtro (Whatman 3 MM, Whatman International, Maidstone, Inglaterra) y se secó al aire a temperatura ambiente antes de almacenarla en bolsas de plástico individuales con gel de sílice. Para cada muestra, se colocaron dos muestras de sangre seca de 1,5 mm de diámetro en el pocillo de una microplaca de PCR de 96 pocillos. Para eliminar la hemoglobina, se agregaron 70 µL de agua de grado de biología molecular a cada pocillo y la placa se incubó a 50 ° C durante cinco minutos, 21 ° C durante 15 s, 50 ° C durante 1,5 min y 21 ° C durante 15 s. Para el protocolo nest1, se agregó un volumen total de mezcla maestra de 25 µL directamente a los pocillos que contenían manchas de sangre. Una vez completado el nest1, la microplaca se centrifugó a temperatura ambiente a 1000 G durante 3 min. Se transfirieron 3 µL de producto de PCR nest1 a una nueva microplaca...
