Ensayos de hibridación in situ con fluorescencia (FISH) para diagnosticar la malaria
Cada frotis fino se preparó a partir de 4 μl de la mezcla, se secó al aire y se fijó con metanol. Cada muestra se analizó mediante ensayos P-Genus, PF y PV FISH. Después de agregar 12 μl de tampón de hibridación apropiado con mezcla de sonda a cada frotis fijado con metanol, el frotis se cubrió con un cubreobjetos de plástico y se colocó en una cámara húmeda a 37 °C durante 30 minutos para la hibridación. Después de 30 minutos, cada frotis se lavó dos veces durante 2 minutos cada uno con 1x Wash Buffer a temperatura ambiente, seguido de un enjuague con 1x Rinse Buffer. Después de secar los frotis en completa oscuridad, se añadió una gota de contratinción a cada frotis. Luego, cada frotis se cubrió con un cubreobjetos de vidrio y se observó en un microscopio de fluorescencia con un aumento de 1000X. En el ensayo P-Genus FISH, la sonda específica de Plasmodium está marcada con un tinte fluorescente verde Alexa 488. Por lo tanto, todos los parásitos Plasmodium aparecerían verdes bajo el...
